期刊简介
《中国临床医学》杂志(CN 31-1794/R，ISSN 1008-6358;邮发代号4-636)1994年创刊，是中华人民共和国教育部主管、复旦大学附属中山医院主办的临床医学类科技核心期刊，由著名的肝胆外科专家樊嘉教授担任主编，目前为双月刊，主要刊登临床医学、转化医学、生命科学、药学等领域的原创性研究论文，栏目形式多样，包括专家述评、论著、研究快报、短篇论著、技术与方法、临床病理(例)讨论、综述、研究简报、短篇报道、病例报告等。
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- 杂志名称：中国临床医学杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：复旦大学附属中山医院
- 国际刊号：1008-6358
- 国内刊号：31-1794/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏
细菌内同源重组构建含人内皮抑素基因腺病毒及在胃癌细胞中的体外转染实验
阴忆青；齐荣；邹卫国；秦新裕；刘新垣
关键词：腺病毒载体, 内皮抑素, 胃癌, 基因治疗, 细菌
摘要：目的:采用细菌内同源重组法构建含人内皮抑素基因的重组腺病毒Ad-CMV-hEn.方法:将hEn基因自pCA13-hEn质粒中酶切下来,亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成转移质粒pAdtrack-CMV-hEn,并用PmeⅠ线性化后与腺病毒基因组质粒pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5183,抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA,PacⅠ酶切后在293细胞中包装成腺病毒颗粒.采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定,同时测定了病毒滴度.并采用RT-PCR检测感染腺病毒的胃癌细胞内有无hEn mRNA的转录.结果:由pAdtrack-CMV-hEn和pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5183后,可得到阳性重组体细菌克隆,包装完成的腺病毒经PCR检测表明已含有hEn基因.纯化所得腺病毒滴度约为2.4×1011 pfu/ml.RT-PCR证实在感染重组体腺病毒Ad.CMV-hEN的细胞中有相应mRNA的转录.结论:细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法.所构建的Ad-CMV-hEn在体外能有效转录相应的mRNA.
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